amplificação e superexpressão de TOP2A em tecidos de Carcinoma hepatocelular

resumo

o carcinoma hepatocelular (CHC) é a principal causa de morte por câncer em homens em todo o mundo devido a insights limitados sobre patogênese e eficácia insatisfatória das terapias atuais. Os genes HER2 e TOP2A são coamplificados na mama e em alguns outros tipos de câncer. Neste estudo, investigamos aberrações genéticas de HER2 e TOP2A e expressões proteicas de HER2, TOP2A, Ki-67 e p53 em tecidos tumorais e não tumorais pareados, bem como suas associações com características clinicopatológicas. As aberrações genéticas foram avaliadas por expressões de peixe e proteína pela IHC. Nem a superexpressão HER2 nem a amplificação do gene HER2 foram observadas em ambos os tecidos tumorais e tecidos não tumorais pareados. Por outro lado, a superexpressão de TOP2A foi detectada em 72,5% dos tecidos tumorais, mas não detectada em tecidos não tumorais pareados. No entanto, a amplificação do gene TOP2A não foi observada em ambos os tecidos tumorais e não tumorais pareados. A superexpressão de TOP2A foi significativamente associada aos tecidos tumorais HCC (P < 0,001), antígeno de superfície da hepatite B (HBsAg) no soro (P = 0,004) e Ki-67 (P = 0.038) mas não com idade, Tamanho do tumor, alfa-fetoproteína, TP53 e número de cópia do gene TOP2A e cromossomo 17 centrômero. Em conclusão, a superexpressão de TOP2A no CHC não foi secundária à amplificação gênica. Além disso, nem a amplificação HER2 nem a superexpressão poderiam ser usadas como marcador prognóstico e preditivo no CHC.

1. Introdução

o câncer de fígado é a segunda principal causa de morte por câncer em homens em todo o mundo . Entre os cânceres hepáticos primários, o carcinoma hepatocelular (CHC) é o principal subtipo histológico globalmente, com 78% do CHC atribuível ao vírus da hepatite B (HBV, 53%) ou ao vírus da hepatite C (HCV, 25%) . HCC é tipicamente um tumor agressivo decorrente de doença hepática crônica e cirrose hepática. O prognóstico do CHC permanece sombrio. A maioria dos pacientes com CHC não são candidatos a terapias curativas (ressecção cirúrgica ou transplante de fígado) devido a doença avançada ou irressecável na apresentação, e as opções terapêuticas disponíveis incluem métodos não cirúrgicos locais de ablação tumoral e terapia sistêmica.

certos oncogenes, incluindo o receptor-2 do fator de crescimento epitelial humano (HER2) e o alfa da topoisomerase II (TOP2A), foram investigados em vários subtipos de câncer como alvos para terapia do câncer, bem como biomarcadores para previsão de resposta. O gene HER2 é um proto-oncogene localizado no cromossomo 17 (17q11.2-q12) e codifica um receptor de tirosina quinase transmembrana de 185 kDa . A amplificação do gene HER2 no câncer de mama tornou-se um biomarcador importante para prever a resposta à terapia direcionada a HER2 . No entanto, o papel do status do gene HER2 e da expressão da proteína HER2 no CHC tem sido controverso . O gene TOP2A está localizado no cromossomo 17 (17q21-q22), a cerca de 700 kb telomérico para o locus do gene HER2 . O gene TOP2A codifica uma enzima nuclear de 170 kDa que controla a estrutura topológica do DNA, a segregação cromossômica e a progressão do ciclo celular . A proteína TOP2A é alvo de vários agentes quimioterapêuticos, como antraciclinas (doxorrubicina, epirrubicina) e epipodofilotoxinas (etoposídeo, teniposídeo). O gene TOP2A é coamplificado com o gene HER2 em aproximadamente 35% dos cânceres de mama amplificados com HER2, e a coamplificação com TOP2A, não a amplificação com HER2, é o marcador preditivo de uma resposta incremental à quimioterapia baseada em antraciclina em cânceres de mama amplificados com HER2 . A superexpressão TOP2A, ou seja, o aumento do nível de mRNA e proteína TOP2A, foi detectado no HCC, mas ainda não está claro se a superexpressão TOP2A no HCC surgiu da amplificação do gene TOP2A. Além disso, nenhum estudo anterior investigou se a coamplificação TOP2A e HER2 existe no HCC. Portanto, para determinar a associação entre TOP2A/amplificação de HER2 e TOP2A/HER2 sobreexpressão no CHC, investigamos gene de cópia de número de HER2 e TOP2A por hibridização in situ por fluorescência (FISH) e proteína expressões de HER2, TOP2A, bem como o Ki-67, e o tumor proteína p53 (TP53) por a coloração imuno-histoquímica (IHC). Em seguida, foram analisadas estatisticamente as associações desses status gênico e expressões proteicas com características clinicopatológicas.

2. Materiais e métodos

2.1. Amostras tumorais e pareadas

quarenta pares de carcinoma hepatocelular (CHC) e tecidos não tumorais dos mesmos pacientes foram obtidos por ressecção cirúrgica das salas de cirurgia, Departamento de Cirurgia, Hospital Ramathibodi. Os tecidos foram congelados a -80 ° C. As seções congeladas foram preparadas e coradas com hematoxilina e eosina (H&E). As lâminas histológicas manchadas de H&e foram revisadas por um patologista experiente. As amostras foram mapeadas com essas lâminas H & E para que as áreas tumorais e pareadas não tumorais fossem selecionadas para preparações de núcleos isolados e para ensaio de IHC. Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em pesquisa envolvendo seres humanos da Faculdade de Medicina do Hospital Ramathibodi, Universidade Mahidol.

2.2. Preparação de núcleos isolados para ensaio de peixes

vinte e dois pares de tumor congelado e tecidos não tumorais pareados estavam disponíveis para preparação de núcleos isolados para ensaio de peixes. Núcleos isolados foram preparados pelo método previamente relatado . Resumidamente, amostras de tecido selecionadas foram incubadas em 500 µL 0,9% de NaCl pH 1,5 por 1 h a 37°C, com vórtice ocasional. As suspensões teciduais foram lavadas com PBS (solução salina tamponada com fosfato) e coadas através de um filtro celular (BD Falcon, EUA). Núcleos isolados foram fixados no fixador de Carnoy (metanol 3 : 1: ácido acético). As preparações de lâminas foram feitas soltando 8 µL de cada suspensão de núcleos em lâminas de vidro e, em seguida, secando-as em um forno de 65°C por 15 min. As preparações foram mantidas a -20 ° C até serem usadas.

2.3. O ensaio de peixes

a amplificação do gene HER2 e TOP2A foram avaliados por hibridização in situ de fluorescência usando o Kit de sonda de DNA PathVysion HER-2 e o kit de sonda de DNA TOP2A, respectivamente (Vysis Inc., Downers Grove, Illinois, EUA), de acordo com o procedimento especificado pelo fabricante com as seguintes modificações. Resumidamente, as lâminas foram incubadas em 2XSSC a 75°C por 20 min. As lâminas foram então digeridas com pepsina (4 mg / mL em NaCl a 0,9%, pH 1,5) por 5 min, mergulhadas em água e enxaguadas com 2XSSC à temperatura ambiente por 5 min. A sonda e o DNA alvo foram codenaturados a 80 ° C por 5 min e hibridizados em uma câmara de umidade durante a noite a 37°C. Após a hibridização, as lamelas foram removidas suavemente e as lâminas foram lavadas com 0,4 XSSC/0,3% NP-40 a 73°C por 2 min. As lâminas foram então transferidas para 2XSSC / 0,1% NP-40 à temperatura ambiente por 1 min. Os núcleos foram contra-encadeados com DAPI II (Vysis Inc., Downers Grove, Illinois, EUA). Os sinais foram contados sob um microscópio de fluorescência (Olympus BX61) equipado com uma lâmpada de mercúrio de 100 W. Para visualizar os sinais, foram utilizados filtros de passagem de banda única para espectro verde, espectro laranja e DAPI. Pelo menos um número total de 100 núcleos interfásicos foram pontuados na maioria dos espécimes. O status HER2 foi determinado de acordo com as diretrizes da ASCO/CAP . Uma razão HER2/centrômero do cromossomo 17 (HER2/CEP17) inferior a 1,8 foi considerada HER2 negativa (HER2 não ampliada), uma razão HER2/CEP17 entre 1,8 e 2,2 como HER2 ambígua e uma razão HER2/CEP17 superior a 2,2 como HER2 positiva (HER2 amplificada). A amplificação do gene TOP2A foi definida como uma relação top2a/CEP17 ≥2.0, enquanto a exclusão de TOP2A foi definida como uma relação TOP2A/CEP17 ≤0,8. O caso foi considerado normal quando a proporção de TOP2A / CEP17 foi entre 0,8 e 2,0. O ganho do cromossomo 17 centrômero foi definido como a média CEP17 ≥3 . Imagens de núcleos foram capturadas pelo software Cytovision (Leica, Reino Unido).

2.4. O ensaio IHC

quarenta pares de tecidos tumorais e não tumorais pareados foram fixados em formalina tamponada a 10% e depois processados e embutidos em parafina. Seções seriais de 4 mícrons foram cortadas e colocadas em lâminas carregadas positivas. As lâminas foram desparafinizadas em xileno e hidratadas por meio de concentrações graduadas de etanol e, finalmente, água destilada. A recuperação do antígeno foi realizada nesta fase com tampão citrato de 10 mM, pH 6,0, em panela de pressão. As seções foram então processadas com um sistema de detecção de valor LP UltraVision (Lab Vision, EUA). Resumidamente, as seções foram bloqueadas com bloco de peróxido de hidrogênio por 15 min à temperatura ambiente, seguido por bloco Ultra V por 10 min à temperatura ambiente. O anticorpo primário de cada marcador foi aplicado em uma diluição otimizada e no tempo de incubação, conforme mostrado na Tabela 1. As seções foram incubadas com potenciador de anticorpos primários de valor por 30 min à temperatura ambiente; em seguida, o polímero de valor HRP foi aplicado e as seções foram incubadas por 1 h à temperatura ambiente. DAB (3, 3 ‘ – diaminobenzidina) foi usado como substrato para revelar a expressão de cada marcador. As lâminas foram contraforadas com hematoxilina e montadas em meio de montagem permanente. Os tecidos com omissão do anticorpo específico foram utilizados como controles negativos. Os Slides foram digitalizados com o Pannoramic MIDI digital slide scanner (3DHISTECH, Hungria).

2.5. IHC Coloração Interpretação

de Acordo com ASCO/CAP diretrizes , expressão de HER2 foi pontuada da seguinte forma: 0, sem coloração; 1+, fraco e incompleto membranosa coloração em >10% das células tumorais; 2+, fraca a moderada, completa membranosa coloração em >10% das células tumorais; 3+, forte, completo membranosa coloração em >30% das células tumorais.

o valor de corte para a positividade da proteína tumoral P53 (TP53) foi uma coloração p53 com núcleos positivos em ≥1% das células, independentemente da intensidade da coloração. O índice de proliferação Ki-67 e a expressão de TOP2A foram avaliados por estimativa visual da porcentagem de núcleos positivos nos tecidos. O índice de proliferação Ki-67 ≥10% foi definido como Ki-67 positivo. A expressão de TOP2A ≥10% foi definida como superexpressão de TOP2A por imunohistoquímica.

2.6. Os imunoensaios de micropartículas Quimioluminescentes (CMIA) para a detecção qualitativa do antígeno de superfície da hepatite B (HBsAg) no soro dos pacientes foram realizados usando o ensaio ARCHITECT HBsAg Qualitative II (Abbot Laboratories, Illinois, EUA).

2.7. Séricos de Alfa-Fetoproteína (AFP) Composição

Electrochemiluminescence imunoensaios (ECLIA) para a determinação quantitativa in vitro de alfa-fetoproteína (AFP) no soro dos pacientes foram realizadas utilizando-se à AFP kit com um cobas e601 analyzer (Roche Diagnostics Limitada GmbH, Mannheim, GM).

2.8. Análises estatísticas

análises estatísticas foram realizadas com SPSS v. 11.5 (SPSS Inc., Chicago, Illinois, EUA). A associação entre a expressão de TOP2A e outras variáveis clinicopatológicas foi determinada usando um teste de Qui-quadrado ( teste). Os valores inferiores a 0.05 foram considerados estatisticamente significativos.

3. Resultados

3.1. Características clinicopatológicas

quarenta pacientes (35 homens, 5 mulheres; faixa etária de 35 a 94 anos, mediana de 51 anos) com carcinoma hepatocelular ressecável foram incluídos neste estudo. As características clinicopatológicas estão resumidas na Tabela 2. Sessenta e cinco por cento dos pacientes tinham tamanhos de tumor maiores ou iguais a 5 cm. A presença de HBsAg no soro foi detectada em 70% dos pacientes. Trinta e dois por cento dos pacientes apresentaram valores séricos de alfa-fetoproteína (AFP) maiores ou iguais a 500 ng/mL. A expressão positiva de TP53 e KI-67 em tecidos de CHC foi detectada em 45% e 75%, respectivamente.

3.2. Association of HER2 Gene Status and Protein Expression

HER2 protein overexpression was investigated in 40 pairs of tumor and matched nontumor tissues; A amplificação do gene HER2 foi investigada em 22 pares dos tecidos. Os resultados mostraram que nem a superexpressão HER2 (pares) nem a amplificação do gene HER2 (pares) foram detectadas nos tecidos tumorais e nos tecidos não tumorais correspondentes. Além disso, a deleção do gene HER2 (razão HER2/CEP17 ≤0,8) foi detectada em 9% (2/22) dos tecidos tumorais, e o ganho do cromossomo 17 centrômero (CEP17 ≥ 3) foi observado em 50% (11/22) dos tecidos tumorais. O ganho representativo de CEP17 e sua expressão negativa de HER2 no tecido tumoral são mostrados na Figura 1.

(a)

b)

(c)

d)

(a)
(b)
(c)
d)

Figura 1

Representante de HER2 (sinal vermelho) e CEP17 (sinal verde) copie o número detectado pelo PEIXE e proteína HER2 expressão detectado pelo IHC. (a) ganho CEP17 com HER2 não amplificado no caso 34, ampliação original ×1000. (B) HER2 expressão negativa no caso 34. (C) amplificação HER2 no tecido do câncer de mama (controle positivo, ampliação original ×1000). (D) expressão de proteína HER2 positiva 3+ no tecido do câncer de mama (controle positivo, mesmo caso que (c)).

3.3. A associação do Estado do gene TOP2A e expressão proteica

a superexpressão proteica TOP2A foi investigada em 40 pares de tecidos tumorais e não tumorais pareados; a amplificação gênica TOP2A foi investigada em 22 pares dos tecidos que também foram utilizados para o estudo de amplificação gênica HER2. No entanto, os resultados do status do gene TOP2A estão disponíveis apenas em 20 tecidos tumorais e 18 tecidos não tumorais pareados. A superexpressão de TOP2A foi detectada em 72,5% (29/40) dos tecidos tumorais, mas não foi detectada nos tecidos não tumorais. No entanto, a amplificação do gene TOP2A não foi detectada em ambos os tecidos tumorais e tecidos não tumorais pareados. Além disso, a deleção do gene TOP2A (razão TOP2A/CEP17 ≤0,8) concomitantemente com deleção do gene HER2 (razão HER2/CEP17 ≤0,8) foi observada em 10% (2/20) dos tecidos tumorais. Um dos tecidos tumorais com deleção gênica TOP2A apresentou superexpressão TOP2A (caso 32), enquanto o outro tecido tumoral não apresentou expressão de TOP2A (caso 34). A discordância entre o número de cópia do gene TOP2A e a expressão da proteína TOP2A é mostrada na Figura 2. O ganho do cromossomo 17 centrômero (CEP17 ≥ 3) foi detectado em 60% (12/20) dos tecidos tumorais.

(a)

b)

(c)

d)

(e)

(f)

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(b)
(c)
(d)
(e)
(f)

Figura 2

O disconcordance entre TOP2A gene (TOP2A, sinal vermelho; CEP17, Sinal Verde) número de cópia detectado por peixe e proteína TOP2A (sinal marrom) expressão detectada por IHC em casos de HCC. (a) caso 34: o resultado dos peixes mostrou exclusão TOP2A (proporção = 0,65, ampliação original ×1000) e expressão TOP2A negativa como mostrado em (b). (C) caso 32: o resultado dos peixes mostrou exclusão TOP2A (proporção = 0,64, ampliação original ×1000) e superexpressão TOP2A (30%) como mostrado em (d). (e) caso 25: o resultado dos peixes mostrou TOP2A normal (razão = 1,07, ampliação original ×1000) e superexpressão TOP2A (90%) como mostrado em (f).

3.4. Associação da expressão proteica de TOP2A e outras características Clinicopatológicas

a superexpressão de TOP2A foi detectada em 72,5% (29/40) dos tecidos tumorais e significativamente associada aos tecidos de CHC (); em outras palavras, só foi encontrada nos tecidos tumorais de CHC. Além disso, a superexpressão de TOP2A nos tecidos tumorais também foi significativamente associada ao HBsAg na expressão sérica () e Ki-67 (). No entanto, não houve associação significativa da superexpressão TOP2A com a idade, Tamanho do tumor, AFP, expressão TP53, número de cópia CEP17 e número de cópia do gene TOP2A, conforme demonstrado na Tabela 3.

4. Discussão

No presente estudo, 65% dos pacientes tiveram o tamanho do tumor ≥5 cm, indicando que estes os pacientes com CHC foram diagnosticados em um estágio posterior, e também 70% dos pacientes tinham HBV-associado do CHC, como indicado pela presença do HBsAg no soro. Também descobrimos que esses tecidos HCC expressavam frequentemente TP53 (45%) e Ki-67 (75%), semelhante aos relatórios anteriores . Foi relatado que a prevalência de HBV e a frequência de expressão de TP53 são maiores em pacientes asiáticos com CHC do que em pacientes americanos com CHC .

a amplificação e a superexpressão de HER2 são encontradas em vários tipos de câncer, incluindo carcinomas de mama, ovário, endometrial e pancreático . A superexpressão HER2 é geralmente resultado da amplificação do gene HER2. Além disso, a amplificação HER2, bem como a superexpressão, estão associadas a um mau prognóstico no câncer de mama e se tornaram um biomarcador essencial preditivo para a resposta à terapia direcionada a HER2 . Em contraste, a investigação do status e expressão do gene HER2 no HCC produziu resultados variados. Embora alguns estudos tenham relatado que o HER2 é amplificado e superexpresso em tecidos de CHC , Xian et al. e Bacaksiz et al. concluiu-se que a superexpressão, bem como a amplificação de HER2, são incomuns no CHC. Hsu et al. também relatou que a superexpressão HER2 é rara em pacientes com CHC avançado. No entanto, nossos resultados mostraram que o HER2 não foi amplificado nem superexpresso em ambos os tecidos tumorais e tecidos não tumorais pareados, sendo consistente com o resultado de Vlasoff et al. . Além disso, nossos resultados mostraram que o número médio de cópias do cromossomo 17 centrômero (CEP17) foi significativamente maior nos tecidos tumorais do que nos tecidos não tumorais pareados ( versus,), mas os ganhos de CEP17 no CHC não foram associados à superexpressão de HER2. Isso é consistente com nosso estudo anterior em tecidos de câncer de mama que, na ausência de amplificação de HER2, os ganhos de CEP17 não têm um efeito significativo na expressão de HER2 . Devido à sua raridade ou ausência, concluímos que nem a amplificação HER2 nem a superexpressão poderiam ser um marcador prognóstico e preditivo comumente usado no carcinoma hepatocelular.O gene TOP2A codifica uma enzima nuclear de 170 KDa que controla a estrutura topológica do DNA e é frequentemente coamplificado com o gene HER2 no câncer de mama e câncer de bexiga . A amplificação do gene TOP2A e a deleção TOP2A podem ser encontradas em 35% e 5% do câncer de mama amplificado por HER2, respectivamente; no entanto, apenas a deleção do gene TOP2A pode ser detectada em 3% do câncer de mama não amplificado por HER2 . Foi relatado que a coamplificação de HER2 e TOP2A no câncer de mama está associada à sensibilidade à antraciclina . A coamplificação de TOP2A no câncer de mama amplificado com HER2 pode causar um aumento da sensibilidade aos inibidores de TOP2A, induzindo a superexpressão da proteína TOP2A . Além disso, a expressão de TOP2A tem sido relatada como um marcador prognóstico valioso para avanços tumorais, recorrências e preditor de pior sobrevida em câncer de pulmão de pequenas células, câncer de ovário, cólon, mama e próstata, bem como carcinoma nasofaríngeo . A superexpressão de TOP2A é um forte indicador de mau prognóstico no câncer de próstata e no carcinoma nasofaríngeo, bem como no subgrupo de câncer de mama HER2 negativo . Alguns estudos encontraram superexpressão de TOP2A no CHC . No entanto, ainda não foi determinado se a superexpressão TOP2A no CHC surgiu da amplificação do gene TOP2A.

neste estudo, TOP2A foi significativamente superexpresso em tecidos tumorais HCC (), mas a amplificação do gene TOP2A não foi detectada nesses tecidos, bem como nenhuma associação significativa entre a expressão da proteína TOP2A e o número da cópia do gene TOP2A. Com base nesses resultados, demonstramos pela primeira vez que a superexpressão TOP2A no CHC não surgiu da amplificação do gene TOP2A. Anteriormente, alguns estudos em câncer de próstata, câncer de mama e carcinomas gástricos também relataram que a superexpressão TOP2A não está intimamente correlacionada com a amplificação TOP2A, em contraste com a forte correlação da superexpressão HER2 com a amplificação HER2 . Além disso, Schindlbeck et al. concluiu-se que a expressão da proteína TOP2A pode ser o alvo da antraciclina independente do número da cópia do gene . Isaacs et al. mostraram que o TOP2A é altamente regulado no nível transcricional e translacional , sugerindo que a superexpressão do TOP2A pode surgir da aberração no nível transcricional ou translacional. Além disso, Srikantan et al. identificaram recentemente a proteína de ligação ao RNA HuR e o microRNA miR-548c-3p como os mediadores cruciais que controlam os níveis de expressão de TOP2A e determinam a eficácia da doxorrubicina .

até onde sabemos, este relatório é o primeiro estudo a mostrar uma associação estatisticamente significativa entre a superexpressão de TOP2A e HBsAg no soro (). No entanto, essa associação precisa ser validada devido ao tamanho da amostra relativamente pequeno deste estudo e a maioria dos pacientes com CHC no presente estudo é positiva para HBsAg. Uma associação significativa entre a superexpressão de TOP2A e a expressão de Ki-67 em tecidos de CHC () também foi observada no presente estudo. A proteína Ki-67 é uma proteína nuclear humana expressa apenas em células em proliferação durante todas as fases ativas do ciclo celular (G1, S, G2 e m fases), mas não nas células em repouso (G0) , enquanto a expressão de TOP2A é indetectável até a fase s tardia, atingiu o pico na fase G2-M e diminuiu à medida que as células completavam a mitose . A expressão Ki-67 e TOP2A pode ser usada como biomarcadores moleculares da proliferação celular em vários tipos de câncer. A expressão de TOP2A está fortemente correlacionada com a expressão de Ki-67 no câncer de mama . Além disso, verificou-se que a expressão de Ki-67 se correlaciona com a taxa de crescimento do tumor e mau prognóstico no CHC .

a superexpressão TOP2A no CHC tem significado prognóstico. Watanuki et al. descobriu-se que a superexpressão de TOP2A no CHC parece estar ligada a um fenótipo tumoral potencialmente agressivo e morte relacionada ao câncer . Além disso, Wong et al. relatou que a superexpressão de TOP2A no CHC se correlaciona com o início precoce da idade, tempos de sobrevivência mais curtos e resistência à quimioterapia à base de doxorrubicina . Portanto, novos agentes quimioterápicos direcionados ao TOP2A com melhor eficácia são urgentemente necessários. Mecanismos de doxorrubicina-resistência é pensado para envolver a indução de multidroga resistência (MDR) mediada por ATP-dependentes de drogas bombas de efluxo, em particular, ABCB1 (MDR1, Pgp) e ABCC1 (MRP1), bem como a concomitante aumento no nível de topoisomerase I. Assim, a detecção de TOP2A sobreexpressão no HCC tecidos, podem ajudar a selecionar adequado de pacientes para o início de ensaios clínicos da novela TOP2A-alvo agentes terapêuticos, o que deverá incluir uma nova classe de topoisomerase II inibidores com potencial antimultidrug capacidades de resistência e de dupla topoisomerase I e II inibidores .

Em resumo, nós achamos que (1) HER2 não foi amplificado nem overexpressed em ambos os CHC tecidos tumorais e nontumor tecidos; (2) TOP2A sobreexpressão no HCC tecidos tumorais não surgir a partir de TOP2A amplificação de genes e foi independente da amplificação do gene HER2 ou sobreexpressão; e (3) TOP2A sobreexpressão foi significativamente associada com HBsAg no soro, bem como com Ki-67 expressão. Assim, pacientes com CHC com superexpressão de TOP2A podem ser candidatos potenciais para novos ensaios terapêuticos direcionados a TOP2A.

conflito de interesses

os autores declaram que não há conflito de interesses em relação à publicação deste artigo.

agradecimentos

os autores agradecem ao Professor Amnuay Thithapandha pela assistência na edição do artigo. O apoio financeiro deste trabalho foi por meio de uma bolsa de pesquisa da Fundação Ramathibodi, Hospital Ramathibodi.

materiais suplementares