TOP2A amplifikation og overekspression i hepatocellulært Carcinomvæv

abstrakt

hepatocellulært carcinom (HCC) er den førende årsag til kræftdød hos mænd over hele verden på grund af begrænset indsigt i patogenese og utilfredsstillende effekt af nuværende terapier. HER2 og TOP2A gener er coamplified i bryst og nogle andre kræftformer. I denne undersøgelse, vi undersøgte genaberrationer af HER2 og TOP2A og proteinekspressioner af HER2, TOP2A, Ki-67, og p53 i tumor og matchede ikke-tumorvæv, såvel som deres tilknytning til klinikopatologiske træk. Genaberrationer blev evalueret af fisk og proteinekspressioner af IHC. Hverken HER2-overekspression eller HER2-genamplifikation blev observeret i både tumorvæv og matchede ikke-tumorvæv. I modsætning hertil blev TOP2A-overekspression påvist i 72,5% af tumorvæv, men ikke påvist i matchede ikke-tumorvæv. TOP2A-genamplifikation blev imidlertid ikke observeret i både tumor-og matchede nontumorvæv. TOP2A-overekspression var signifikant forbundet med HCC-tumorvæv (P < 0,001), hepatitis B-overfladeantigen (HBsAg) i serum (P = 0,004) og Ki-67 (P = 0.038) men ikke med alder, tumorstørrelse, alfa-fetoprotein, TP53 og kopiantal af TOP2A gen og kromosom 17 centromere. Afslutningsvis var TOP2A-overekspression i HCC ikke sekundær til genamplifikation. Derudover kunne hverken HER2-amplifikation eller overekspression bruges som prognostisk og forudsigelig markør i HCC.

1. Introduktion

leverkræft er den næstledende årsag til kræftdød hos mænd over hele verden . Blandt primære levercancer er hepatocellulært carcinom (HCC) den største histologiske undertype globalt, hvor 78% af HCC kan henføres til hepatitis B-virus (HBV, 53%) eller hepatitis C-virus (HCV, 25%) . HCC er typisk en aggressiv tumor som følge af kronisk leversygdom og levercirrhose. Prognosen for HCC forbliver dystre. Størstedelen af HCC-patienter er ikke kandidater til helbredende terapier (kirurgisk resektion eller levertransplantation) på grund af avanceret eller inoperabel sygdom ved præsentation, og de tilgængelige terapeutiske muligheder inkluderer lokale ikke-kirurgiske metoder til tumorablation og systemisk terapi.

visse onkogener, herunder human epithelial vækstfaktorreceptor-2 (HER2) og topoisomerase II alpha (TOP2A), er blevet undersøgt i forskellige kræftundertyper som mål for kræftbehandling såvel som biomarkører til forudsigelse af respons. HER2-genet er et proto-onkogen placeret på kromosom 17 (17k11, 2-12.kvartal) og koder for en 185 kDa transmembran tyrosinkinasereceptor . HER2-genforstærkning i brystkræft er blevet en vigtig biomarkør til forudsigelse af respons på HER2-målrettet terapi . Rollen af HER2-genstatus og HER2-proteinekspression i HCC har imidlertid været kontroversiel . TOP2A-genet er placeret på kromosom 17 (17k21-22 .kvartal) på omkring 700 kb telomer til HER2-genlokalet. TOP2A-genet koder for et 170 kDa-nukleart stof, der styrer DNA-topologisk struktur, kromosomsegregering og cellecyklusprogression . TOP2A-protein er målrettet mod flere kemoterapeutiske midler, såsom antracykliner (doksorubicin, epirubicin) og epipodophyllotoksiner (etoposid, teniposid). TOP2A-genet er coamplificeret med HER2-genet i ca .35% af HER2-amplificerede brystkræftformer, og TOP2A-coamplificering, ikke HER2-amplifikation, er den forudsigelige markør for en trinvis respons på anthracyclinbaseret kemoterapi i HER2-amplificerede brystkræftformer. TOP2A-overekspression, det vil sige øget niveau af TOP2A mRNA og protein, er blevet påvist i HCC , men det er fortsat uklart, om TOP2A-overekspression i HCC er opstået fra TOP2A-genamplificering. Derudover har ingen tidligere undersøgelse undersøgt, om TOP2A og HER2 coamplification eksisterer i HCC. For at bestemme sammenhængen mellem top2a / HER2-amplifikation og TOP2A/HER2-overekspression i HCC undersøgte vi derfor genkopiantal for både HER2 og TOP2A ved fluorescens in situ-hybridisering (fisk) og proteinekspressioner af HER2, TOP2A såvel som Ki-67 og tumorprotein p53 (TP53) ved immunhistokemisk farvning (IHC). Derefter blev associeringerne af disse genstatus og proteinekspressioner med klinikopatologiske træk statistisk analyseret.

2. Materialer og metoder

2.1. Tumor og matchede tumorprøver

fyrre par hepatocellulært carcinom (HCC) og nontumorvæv fra de samme patienter blev opnået ved kirurgisk resektion fra operationsstuerne, kirurgisk afdeling, Ramathibodi Hospital. Væv blev snapfrosset ved -80 C. frosne sektioner blev fremstillet og farvet med hæmatoksylin og eosin (H&E). H & E farvede histologiske dias blev gennemgået af en erfaren patolog. Prøver blev kortlagt med disse h & e-dias, så tumor-og matchede ikke-tumorområder blev valgt til præparater af isolerede kerner og til IHC-analyse. Denne undersøgelse blev godkendt af det etiske udvalg for forskning, der involverede menneskelige emner ved Det Medicinske Fakultet, Ramathibodi Hospital, Mahidol University.

2.2. Fremstilling af isolerede kerner til Fiskeanalyse

toogtyve par frosne tumor-og matchede nontumorvæv var tilgængelige til fremstilling af isolerede kerner til fiskeanalyse. Isolerede kerner blev fremstillet ved den tidligere rapporterede metode . Kort fortalt blev udvalgte vævsprøver inkuberet i 500 liter 0,9% NaCl pH 1,5 i 1 time ved 37 liter C med lejlighedsvis hvirvel. Vævssuspensioner blev vasket med PBS (fosfatbufret saltvand) og anstrengt gennem en cellesil (BD Falcon, USA). Isolerede kerner blev fikseret i Carnoy ‘ s fikseringsmiddel (3 : 1 methanol : eddikesyre). Glidepræparater blev fremstillet ved at droppe 8 liter af hver kernesuspension på glasskinner og derefter tørre dem i en 65 liter C ovn i 15 min. Præparaterne blev holdt på -20 liter C, indtil de blev brugt.

2.3. FISKEANALYSE

HER2-og TOP2A-genamplifikation blev vurderet ved fluorescens in situ-hybridisering under anvendelse af henholdsvis PathVysion HER-2 DNA-probesættet og TOP2A DNA-probesættet (Vysis Inc. I henhold til den procedure, der er specificeret af producenten med følgende ændringer. Kort fortalt blev objektglassene inkuberet i 2KSSC ved 75 liter C i 20 minutter. Objektglassene blev derefter fordøjet med pepsin (4 mg/mL i 0,9% NaCl, pH 1,5) i 5 minutter, dyppet i vand og skyllet med 2kssc ved stuetemperatur i 5 minutter. Sonden og mål-DNA ‘ et blev kodenatureret ved 80 liter C i 5 minutter og hybridiseret i et fugtkammer natten over ved 37 liter C. Efter hybridisering blev dækslips forsigtigt fjernet, og objektglassene blev vasket med 0,4% NP-40 ved 73 liter C i 2 minutter. Objektglassene blev derefter overført til 2HSSC / 0,1% NP-40 ved stuetemperatur i 1 min. Kerner blev modfarvet med DAPI II (Vysis Inc. Lund, Illinois, USA). Signaler blev talt under et fluorescensmikroskop (Olympus BH61) udstyret med en 100V kviksølvlampe. For at se signaler, enkelt bandpass filtre til spectrum green, spectrum orange, og DAPI blev brugt. Mindst et samlet antal på 100 interfasekerner blev scoret fra de fleste prøver. HER2-status blev bestemt i henhold til ASCO/CAP-retningslinjerne . Et HER2/centromere af kromosom 17 (HER2/CEP17) – forhold på mindre end 1,8 blev betragtet som HER2-negativt (HER2-ikke-forstærket), et HER2/CEP17-forhold mellem 1,8 og 2,2 som HER2-tvetydigt og et HER2 / CEP17-forhold højere end 2,2 som HER2-positivt (HER2-forstærket). TOP2A-genamplifikation blev defineret som et top2a / CEP17-forhold på 2.0, hvorimod top2a-sletning blev defineret som et TOP2A / CEP17-forhold på 0,8. Sagen blev betragtet som normal, når forholdet mellem TOP2A/CEP17 var mellem 0,8 og 2,0. Forstærkning af kromosom 17 centromere blev defineret som den gennemsnitlige cep17-kur 3 . Billeder af kerner blev taget af Cytovision-programmet (Leica, UK).

2.4. IHC-analyse

fyrre par tumor-og matchede ikke-tumorvæv blev fikseret i 10% bufret formalin og derefter behandlet og indlejret i paraffin. Serielle 4-mikron sektioner blev skåret og anbragt på positive ladede dias. Objektglassene blev deparaffineret og hydreret gennem graduerede koncentrationer af ethanol og til sidst destilleret vand. Antigenudtagning blev udført på dette trin med 10 mM citratbuffer, pH 6,0, i en trykkomfur. Sektioner blev derefter behandlet med et UltraVision LP Value Detection System (Lab Vision, USA). Kort sagt blev sektioner blokeret med brintoverilte blok i 15 minutter ved stuetemperatur efterfulgt af Ultra V blok i 10 minutter ved stuetemperatur. Primær antistof af hver markør blev påført ved en optimeret fortynding og inkubationstiden, som vist i tabel 1. Sektioner blev inkuberet med værdi primær Antistofforstærker i 30 minutter ved stuetemperatur; derefter blev værdi HRP-Polymer påført, og sektionerne blev inkuberet i 1 time ved stuetemperatur. DAB (3, 3′-diaminobensidin) blev anvendt som substrat til at afsløre ekspressionen af hver markør. Slides blev modfarvet med hæmatoksylin og monteret i permanent monteringsmedium. Væv med udeladelse af det specifikke antistof blev anvendt som negative kontroller. Slides blev scannet med PANNORAMIC MIDI digital slide scanner (3DHISTECH, Ungarn).

2.5. IHC-Farvningstolkning

i henhold til ASCO/CAP-retningslinjer blev HER2-ekspression scoret som følger: 0 , ingen farvning; 1+, svag og ufuldstændig membranøs farvning i >10% af tumorcellerne; 2+, svag til moderat, komplet membranøs farvning i >10% af tumorcellerne; 3+, stærk, komplet membranøs farvning i > 30% af tumorcellerne.

afskæringsværdien for tumorprotein p53 (TP53) positivitet var en p53-farvning med positive kerner i 1% af cellerne, uanset farvningsintensiteten. Ki-67 proliferationsindeks og TOP2A-ekspression blev vurderet ved visuel estimering af procentdelen af positive kerner i vævene. Ki-67-spredningsindeks på 10% blev defineret som Ki-67-positivt. TOP2A-ekspression kur 10% blev defineret som TOP2A-overekspression ved immunhistokemi.

2.6. Serum Hepatitis B overfladeantigen (HBsAg) Assay

kemiluminescerende mikropartikelimmunoassays (CMIA) til kvalitativ påvisning af hepatitis B overfladeantigen (HBsAg) i serum fra patienterne blev udført ved hjælp af Architect HBsAg kvalitativ II assay (Abbot Laboratories, Illinois, USA).

2.7. Serum alfa-Fetoprotein (AFP) Assay

Elektrokemiluminescens immunoassays (ECLIA) til in vitro kvantitativ bestemmelse af alfa-fetoprotein (AFP) i serum fra patienterne blev udført ved hjælp af AFP kit med en cobas e601 analysator (Roche Diagnostics Limited GmbH, Mannheim, GM).

2.8. Statistiske analyser

statistiske analyser blev udført med SPSS v. 11.5 (SPSS Inc., Chicago, Illinois, USA). Sammenhæng mellem TOP2A-ekspression og andre klinikopatologiske variabler blev bestemt ved anvendelse af en chi-firkantet test ( test). Værdierne er mindre end 0.05 blev betragtet som statistisk signifikante.

3. Resultater

3.1. Klinikopatologiske træk

fyrre patienter (35 mænd, 5 kvinder; aldersgruppe 35-94 år, median 51 år) med resekterbart hepatocellulært carcinom blev inkluderet i denne undersøgelse. Klinikopatologiske træk er opsummeret i tabel 2. Femogtres procent af patienterne havde tumorstørrelser større end eller lig med 5 cm. Tilstedeværelse af HBsAg i serum blev påvist hos 70% af patienterne. Toogtredive procent af patienterne præsenterede serum alfa-fetoprotein (AFP) værdier større end eller lig med 500 ng/mL. Positiv TP53-og KI-67-ekspression i HCC-væv blev påvist hos henholdsvis 45% og 75%.

3.2. Association of HER2 Gene Status and Protein Expression

HER2 protein overexpression was investigated in 40 pairs of tumor and matched nontumor tissues; HER2-genamplifikation blev undersøgt i 22 par af vævene. Resultaterne viste, at hverken HER2-overekspression ( par) eller HER2-genamplifikation ( par) blev påvist i tumorvæv og matchede ikke-tumorvæv. Derudover blev HER2 – gen-deletion (HER2 / CEP17-forhold 0,8) detekteret i 9% (2/22) tumorvæv, og forstærkning af kromosom 17 centromere (CEP17-Kurt 3) blev observeret i 50% (11/22) tumorvæv. Repræsentativ cep17 gain og dens negative HER2-ekspression i tumorvæv er vist i Figur 1.

(a)

(b)

(c)

(d)

(a)
(b)
(c)
(d)

Figur 1

repræsentativt HER2 (rødt signal) og cep17 (grønt signal) kopinummer detekteret af fisk og HER2-proteinekspression detekteret af IHC. (- en) CEP17 gevinst med nonamplified HER2 i tilfælde 34, oprindelige forstørrelse til 1000. B) HER2 negativt udtryk i sag 34. C) HER2-amplifikation i brystkræftvæv (positiv kontrol, oprindelig forstørrelse på 1000). (D) HER2-proteinekspression positiv 3+ i brystkræftvæv (positiv kontrol, samme tilfælde som (c)).

3.3. Forening af TOP2A-Genstatus og proteinekspression

TOP2A-proteinoverekspression blev undersøgt i 40 par tumor-og matchede ikke-tumorvæv; TOP2A-genamplificering blev undersøgt i 22 par af vævene, som også blev brugt til HER2-genamplificeringsstudie. Resultaterne af TOP2A-genstatus er imidlertid kun tilgængelige i 20 tumorvæv og 18 matchede ikke-tumorvæv. TOP2A overekspression blev påvist i 72,5% (29/40) af tumorvæv, men blev ikke påvist i nontumorvæv. TOP2A – genamplifikation blev imidlertid ikke påvist i både tumorvæv og matchede ikke-tumorvæv. Derudover blev top2a-gen-deletion (TOP2A/CEP17-forhold 0,8) samtidig med HER2-gen-deletion (HER2/CEP17-forhold 0,8) observeret i 10% (2/20) af tumorvæv. Et af tumorvævene med top2a-gen-deletion viste TOP2A-overekspression (sag 32), mens det andet tumorvæv ikke viste nogen ekspression af TOP2A (sag 34). Uoverensstemmelsen mellem TOP2A-genkopitalnummer og TOP2A-proteinekspression er vist i figur 2. Forstærkning af kromosom 17 centromere (CEP17-liter 3) blev påvist i 60% (12/20) af tumorvæv.

(a)

(b)

(c)

(d)

(e)

(f)

(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)

figur 2

uoverensstemmelsen mellem TOP2A-genet (TOP2A, rødt signal; Cep17, grønt signal) kopi nummer detekteret af fisk og TOP2A protein (brunt signal) ekspression detekteret af IHC i tilfælde af HCC. (a) sag 34: fisk resultat viste top2a sletning (ratio = 0,65, oprindelige forstørrelse til 1000) og negativ TOP2A udtryk som vist i (b). (C) sag 32: FISKERESULTAT viste top2a-sletning (forhold = 0,64, oprindelig forstørrelse på 1000) og TOP2A-overekspression (30%) som vist i (d). (e) sag 25: FISKERESULTATET viste normal TOP2A (forhold = 1,07, oprindelig forstørrelse på 1000) og TOP2A overekspression (90%) som vist i (f).

3.4. Forening af TOP2A-proteinekspression og andre Klinikopatologiske træk

TOP2A-overekspression blev påvist i 72,5% (29/40) af tumorvæv og signifikant forbundet med HCC-væv (); med andre ord blev det kun fundet i HCC-tumorvæv. Derudover var TOP2A-overekspression i tumorvæv også signifikant forbundet med HBsAg i serum () og Ki-67-ekspression (). Ikke desto mindre var der ingen signifikant sammenhæng mellem TOP2A-overekspression med alder, tumorstørrelse, AFP, TP53-ekspression, cep17-kopinummer og TOP2A-genkopienummer, som vist i tabel 3.

4. Diskussion

i denne undersøgelse havde 65% af patienterne tumorstørrelse på 5 cm, hvilket indikerer, at disse HCC-patienter blev diagnosticeret på et senere tidspunkt, og også 70% af patienterne havde HBV-associeret HCC, som indikeret ved tilstedeværelsen af HBsAg i serum. Vi fandt også, at disse HCC-væv ofte udtrykte TP53 (45%) og Ki-67 (75%), svarende til tidligere rapporter . Det er rapporteret, at forekomsten af HBV og hyppigheden af TP53-ekspression er højere hos asiatiske HCC-patienter end hos amerikanske HCC-patienter .

HER2-amplifikation og overekspression findes i flere kræftformer, herunder bryst -, ovarie -, endometrie-og bugspytkirtelcarcinomer . HER2-overekspression er normalt et resultat af HER2-genamplificering. Derudover er HER2-amplifikation såvel som overekspression forbundet med dårlig prognose i brystkræft og er blevet en væsentlig biomarkør, der er forudsigelig for responsen på HER2-målrettet terapi . I modsætning hertil har undersøgelsen af HER2-genstatus og-ekspression i HCC givet forskellige resultater. Selvom nogle undersøgelser rapporterede , at HER2 forstærkes og overudtrykkes i HCC-væv, Ksian et al. et al. konkluderede, at overekspression såvel som amplifikation af HER2 er usædvanlig i HCC. Hsu et al. også rapporteret, at HER2 overekspression er sjælden hos patienter med avanceret HCC. Imidlertid, vores resultater viste, at HER2 hverken blev forstærket eller overudtrykt i både tumorvæv og matchede ikke-tumorvæv, være i overensstemmelse med resultatet af Vlasoff et al. . Desuden viste vores resultater, at det gennemsnitlige kopiantal af kromosom 17 centromere (CEP17) var signifikant højere i tumorvæv end i matchede ikke-tumorvæv ( versus , ), men gevinsterne af CEP17 i HCC var ikke forbundet med HER2 overekspression. Dette er i overensstemmelse med vores tidligere undersøgelse i brystkræftvæv, at gevinster på CEP17 i fravær af HER2-amplifikation ikke har en signifikant effekt på HER2-ekspression . På grund af dets sjældenhed eller fravær konkluderede vi, at hverken HER2-amplifikation eller overekspression kunne være en almindeligt anvendt prognostisk og forudsigelig markør i hepatocellulært carcinom.

TOP2A-genet koder for en 170 KDa-kernestyret DNA-topologisk struktur og kombineres ofte med HER2-genet i brystkræft og blærekræft . TOP2A-genforstærkning og top2a-deletion kunne findes i henholdsvis 35% og 5% af HER2-amplificeret brystkræft; imidlertid kunne kun top2a-gen-deletion påvises i 3% af HER2-ikke-forstærket brystkræft . Det er rapporteret, at coamplificering af HER2 og TOP2A i brystkræft er forbundet med følsomhed over for antracyklin . TOP2A-coamplificering i HER2-forstærket brystkræft kan medføre øget følsomhed over for TOP2A-hæmmere ved at inducere overekspression af TOP2A-proteinet . Desuden er TOP2A-ekspression rapporteret at være en værdifuld prognostisk markør for tumorfremskridt, gentagelser og forudsigelse for dårligere overlevelse i småcellet lungekræft, ovarie -, kolon -, bryst-og prostatacancer samt nasopharyngeal carcinoma . TOP2A overekspression er en stærk indikator for dårlig prognose i prostatacancer og i nasopharyngeal carcinoma såvel som i undergruppen af HER2 negativ brystkræft . Et par undersøgelser har fundet TOP2A overekspression i HCC . Det er dog endnu ikke bestemt, om TOP2A-overekspression i HCC er opstået fra TOP2A-genamplificering.

i denne undersøgelse blev TOP2A signifikant overudtrykt i HCC-tumorvæv (), men TOP2A-genamplificering blev ikke påvist i disse væv såvel som ingen signifikant sammenhæng mellem TOP2A-proteinekspression og TOP2A-genkopienummer. Baseret på disse resultater har vi for første gang demonstreret, at TOP2A-overekspression i HCC ikke stammer fra top2a-genamplificering. Tidligere rapporterede nogle undersøgelser i prostatacancer, brystkræft og gastrisk carcinomer også, at TOP2A-overekspression ikke er tæt korreleret med TOP2A-amplifikation i modsætning til den stærke korrelation af HER2-overekspression med HER2-amplifikation . Derudover schindlbeck et al. konkluderede, at TOP2A-proteinekspression snarere kan være målet for antracyclin uafhængigt af genkopienummer . Isaacs et al. har vist, at TOP2A er stærkt reguleret på transkriptions-og translationsniveau , hvilket antyder, at TOP2A-overekspression kan opstå som følge af aberration på transkriptions-eller translationsniveau. Desuden Srikantan et al. har for nylig identificeret det RNA-bindende protein HuR og microRNA miR-548c-3p som de afgørende mediatorer, der styrer top2a-ekspressionsniveauer og bestemmer effektiviteten af doksorubicin .

så vidt vi ved, er denne rapport den første undersøgelse, der viser en statistisk signifikant sammenhæng mellem TOP2A-overekspression og HBsAg i serum (). Imidlertid, denne tilknytning skal valideres på grund af den relativt lille prøvestørrelse af denne undersøgelse, og de fleste af HCC-patienterne i denne undersøgelse er HBsAg-positive. En signifikant sammenhæng mellem TOP2A-overekspression og Ki-67-ekspression i HCC-væv () er også blevet observeret i den aktuelle undersøgelse. Ki-67-protein er et humant nukleart protein, der kun udtrykkes i prolifererende celler i alle de aktive faser af cellecyklussen (G1, s, G2 og M faser), men ikke i hvilende celler (G0) , mens TOP2A-ekspression ikke kan påvises indtil sen s-fase, toppede i G2-M-fase og faldt, da cellerne afsluttede mitose . Både Ki-67 og TOP2A-ekspression kan bruges som molekylære biomarkører for celleproliferation i forskellige kræftformer. TOP2A-ekspression er stærkt korreleret med Ki-67-ekspression i brystkræft . Desuden Har Ki-67-ekspression vist sig at korrelere med tumorvæksthastighed og dårlig prognose i HCC .

TOP2A overekspression i HCC har prognostisk betydning. Anuki et al. fandt, at TOP2A overekspression i HCC ser ud til at være forbundet med en potentielt aggressiv tumorfænotype og kræftrelateret død . Desuden, Vong et al. rapporterede, at TOP2A-overekspression i HCC korrelerer med tidlig aldersstart, kortere overlevelsestider og resistens over for doksorubicinbaseret kemoterapi . Derfor er nye TOP2A-målrettede kemoterapeutiske midler med bedre effektivitet presserende. Det menes at involvere induktion af multidrugresistens (MDR) medieret af ATP-afhængige lægemiddeludstrømningspumper, især ABCB1 (MDR1, Pgp) og ABCC1 (MRP1), såvel som den samtidige stigning i niveauet af topoisomerase I. påvisning af TOP2A-overekspression i HCC-væv kan således hjælpe med at vælge passende patienter til tidlige kliniske forsøg med de nye top2a-målrettede terapeutiske midler, som bør omfatte en ny klasse af topoisomerase II-hæmmere med potentiel antimultidrugresistensfunktioner og dobbelt topoisomerase I-og II-hæmmere .

sammenfattende fandt vi, at (1) HER2 hverken blev forstærket eller overudtrykt i både HCC-tumorvæv og ikke-tumorvæv; (2) TOP2A-overekspression i HCC-tumorvæv opstod ikke fra top2a-genamplificering og var uafhængig af HER2-genamplificering eller overekspression; og (3) TOP2A-overekspression var signifikant forbundet med HBsAg i serum såvel som med Ki-67-ekspression. Således kan HCC-patienter med TOP2A-overekspression være potentielle kandidater til nye TOP2A-målrettede terapeutiske forsøg.

interessekonflikt

forfatterne erklærer, at der ikke er nogen interessekonflikt med hensyn til offentliggørelsen af dette papir.

anerkendelser

forfatterne takker Professor Amnuay Thithapandha for hjælp til redigering af papiret. Økonomisk støtte til dette arbejde var ved et forskningsstipendium fra Ramathibodi Foundation, Ramathibodi Hospital.

supplerende materialer